Биология строения мха как изучать. Советы и приемы

Биология строения мха как изучать. Советы и приемы

Биология строения мха как изучать. Советы и приемы

Bryum caespiticium — перистом

Со временем каждый бриолог разрабатывает способы получения максимальной отдачи от своих полевых исследований и микроскопии. Многие методы неофициально передаются от одного человека к другому и могут нигде не записываться, но они могут иметь огромное значение для успешного изучения мохообразных. В этом разделе мы поделимся некоторыми из наших любимых советов и приемов — надеемся, они будут вам полезны! 

Подготовка слайдов

Делаем листья плоскими

Листья некоторых мхов имеют раздражающую тенденцию не лежать ровно на предметном стекле, а это означает, что верхние части листа часто затемняются. К этой категории относятся слегка изогнутые листья многих акрокарповых , в том числе  Dicranum ,  Dicranella ,  Grimmia  и  Ceratodon . При выделении  Didymodon  важно иметь возможность видеть, являются ли клетки косты в верхней части листа на вентральной (верхней) поверхности изодиаметрическими или удлиненными  , а также , для  Didymodon vinealis  и родственных видов, видеть, есть ли представляет  собой полупрозрачную бороздку в верхушечной части листа. Когда листья таких видов отрывают от стеблей и помещают под покровное стекло, они почти всегда  ориентируются «неправильной» стороной вверх.  

Один из способов добиться того, чтобы верхняя часть листа лежала ровно на предметном стекле, состоит в том, чтобы взять целый сухой стебель, поместить его на сухое предметное стекло под  стереомикроскоп  рядом с каплей воды и, придавив стебель указательным пальцем, срезать самую верхнюю часть. листья поперечно выше их середины бритвенным лезвием. Когда половинки листьев вдавливаются в каплю, вы обнаружите, что они лежат более плоско, чем если бы они все еще были прикреплены к своим нижним частям. У  Didymodon этот метод также можно комбинировать с разрезанием листовых пластинок, делая первый надрез примерно на 4/5 пути вверх по кончику листа, а затем надрезая по направлению к пальцу, чтобы получить серию очень тонких срезов нерва и листовой пластинки. 

При осмотре ветвей листьев  видов Sphagnum  часто бывает необходимо рассмотреть или измерить поры или  гиалоцисты,  видимые на выпуклой наружной поверхности листа. К сожалению, поскольку такие листья имеют тенденцию быть очень вогнутыми, они имеют сильную тенденцию плавать вогнутой стороной вверх, когда их помещают в каплю воды. Вы можете исправить это, поместив листья в каплю воды на покровное стекло, поместив предметное стекло на покровное стекло, а затем перевернув его так, чтобы покровное стекло оказалось сверху. Этот метод может работать и с листьями Дидимодона .

Обращение  с покровными стеклами 

Чтобы не оставить отпечатков пальцев на покровных стеклах, некоторые люди держат их на тонком кусочке пенопласта; затем легко нажать пальцем на пену с обеих сторон покровного стекла, чтобы поднять его. В качестве еще одного нововведения вы можете приклеить для этой цели небольшой кусок пенопласта к штативу стереомикроскопа. 

Покровные стекла и предметные стекла можно многократно использовать повторно, если их содержать в чистоте. Если они загрязнятся, просто нанесите несколько капель изопропилового спирта (IPA) и аккуратно протрите салфеткой или чистой тканью для линз.  

Использование пятен

Окрасьте  листья сфагнума  1% метиленовым синим, кристаллическим фиолетовым (или другим красителем по вашему выбору), чтобы легче увидеть   поры гиалоцист и т. д. Окрашивание листьев других видов, таких как  Dicranum , также делает пористые клеточные стенки более заметными. Добавьте небольшое количество красителя с помощью тонкой пипетки (покупной или сделанной из переработанной бутылки для глазных капель) в каплю воды на предметном стекле, а затем добавьте покровное стекло. Равномерного распределения красителя под покровным стеклом можно добиться, осторожно промокнув салфеткой край покровного стекла, чтобы вытянуть жидкость. Если вы использовали слишком много красителя, добавьте больше воды и промокните тканью с противоположной стороны покровного стекла.

Лист ветки с порами

Удаление почвы и другого мусора с ризоидных побегов

Почва вокруг ризоидов мелких  акрокарпов  , таких как  Bryum ,  Dicranella  и  Pohlia ,  часто скрывает ризоидальные  почки  , необходимые для идентификации. Чтобы удалить почву, наполните небольшой горшок для образцов водой наполовину, добавьте небольшое количество стеблей и почвы (полезно, если сначала аккуратно разбить щипцами особенно твердые комки), плотно закрутите крышку и дайте ей впитаться в течение минимум 10 мин. Затем несколько раз энергично встряхните; если почва тяжелая глина, может потребоваться больше. Эта процедура отделяет много почвы от ризоидов, и когда растения затем рассматривают в чистой воде под стереомикроскопом, любые ризоидные  геммыдолжно быть более очевидным. Этот метод также хорошо работает для удаления инкрустированного осадка с листьев водных видов, таких как Rhynchostegiella teneriffae .  

Методы секционирования

Для прогресса в изучении мохообразных важно овладение приемами срезов листьев, коробочек и стеблей. Это то, что улучшается с практикой, поэтому не отчаивайтесь, если ваши первые несколько разделов не соответствуют вашим ожиданиям. И, если у вас будет возможность, понаблюдайте, как опытные бриологи делают свои разрезы; часто существует более одной техники, поэтому важно найти ту, которая работает для вас.  

Как правило, секционирование требует сосредоточенности, твердой руки и хороших инструментов — подходящего стереомикроскопа ( диссекционного)  с достаточно большим столиком для работы, парой щипцов или игл с тонкими наконечниками для  препарирования  и острым бритвенным лезвием. Для достижения наилучших результатов при разрезании листьев всегда используйте совершенно новое лезвие, так как оно на удивление быстро затупляется. Однако использованные лезвия можно использовать для резки капсул и других толстых материалов. Нет необходимости в специальных лезвиях — вы можете использовать сменные лезвия для старомодных (многоразовых) мужских бритв, которые продаются во многих крупных магазинах и в интернет-магазинах. Чтобы продлить срок службы этих лезвий, некоторые люди разрезают их пополам. 

Срезы листьев, показывающие замыкающие клетки в 2 яруса.

Техника 1: «пальцевый» метод

Эта техника хороша для листьев и стеблей, когда материала много, и хороша для начинающих, так как требует меньшей ловкости, чем некоторые другие. Будьте осторожны при обращении с бритвенными лезвиями!

Обрезка листьев мхов лучше всего работает, когда листья  более или менее прижаты  к стеблю. Некоторые виды, у которых листья торчат или отгибаются от стебля во влажном состоянии, например,  Didymodon ,  Polytrichum ,  можно оставить сохнуть, когда листья часто лежат более прижатыми. Для этих видов выберите один хорошо выросший сухой побег и поместите его на предметное стекло под стереомикроскоп. Выровняйте побег посередине предметного стекла так, чтобы он был параллелен длинной стороне предметного стекла, а его верхние листья были направлены прямо на каплю воды на расстоянии не более 1 см. Хитрость заключается в том, чтобы держать побег сухим, но вытолкнуть срезы в  каплю . как вы работаете. Надавите кончиком указательного пальца на побег так, чтобы были видны только кончики самых верхних листьев. Затем, глядя в микроскоп, возьмите новое лезвие и сделайте надрез поперек побега, надавливая пальцем. Стремитесь получить несколько ломтиков, нарезая несколько раз в одном и том же месте, толкая лезвием выступы к  капле  воды. Делая это, вы получите значительное количество непригодного материала в  капле , но также должны быть и хорошие (тонкие) участки. Если у вас  не  получилось с первого раза,  не  расстраивайтесь. Улучшение  обязательно наступит с небольшой практикой. С видами, у которых листья естественным образом хрустят или скручиваются при высыхании, метод «пальца» также можно использовать с гидратированными (но не мокрыми) растениями. 

Вы также можете заменить палец слайдом, чтобы удерживать выстрел. Это имеет то преимущество, что предлагает прямую кромку для резки, но слайд, как правило, немного сложнее перемещать, если вы стремитесь к нескольким секциям. 

Если вы только начинаете, рекомендуется сначала потренироваться на чем-нибудь легком. Листья Polytrichum , как правило, довольно большие, прямые и жесткие, поэтому с ними относительно легко обращаться. Срезы листьев тоже интересны!

Техника 2: метод «плавающего слайда / мини-лезвия».

Кен Адамс описал свою технику вырезания тонких срезов в книге « Полевая бриология » 88, 2006 г. и предоставил иллюстрированную версию для загрузки ниже. 

Резка секций методом «плавающих ползунков»

Техника 3: Быстрый метод для сфагнума и т. д . с использованием ножниц.

Это простой и быстрый метод, который хорошо подходит для срезов листьев сфагнума и не требует специального оборудования, кроме небольшой пары острых ножниц. Он также подходит для Polytrichum  , и его, возможно, стоит попробовать на других побегах, не слишком маленьких и нежных.Видео-плеер00:0002:26

Капсулы 

Чтобы исследовать перистомы и  экзотециальные  клетки, например,  Bryum ,  Orthotrichum Lewinskya ,  Ulota ,  замочите хорошо развитую капсулу в воде. Затем промокните его салфеткой и поместите на предметное стекло под  стереомикроскоп  . Чтобы исследовать перистом и клетки вокруг кольца, крепко удерживайте капсулу щипцами и разрезайте  поперек . поперек него недалеко от перистома. Удалите нижнюю часть капсулы и любую щетинку, прежде чем разрезать перистом и верхнюю часть капсулы пополам в продольном направлении и аккуратно переместить половинки на новое (сухое) предметное стекло. Если присутствуют какие-либо споры, большинство из них останется на этом этапе. Аккуратно используйте щипцы, чтобы расположить половинки перистома так, чтобы одна из них показывала внутреннюю перистому вверху, а другая показывала внешнюю перистому. Будьте особенно осторожны, чтобы не коснуться очень хрупкого внутреннего перистома. Сверху положите покровное стекло и  осторожно промойте  его от края с помощью тонкой  пипетки . Пузырьки воздуха можно уменьшить, добавив небольшое количество бытового поверхностно-активного вещества  , например,  мыла,  шампуня . или жидкость для мытья посуды в воду для уменьшения поверхностного натяжения. 

Выбранные изображения

Несколько изображений срезов под мощным микроскопом, показывающих, к чему вы стремитесь.

Полезные инструменты для микроскопии

Флакон с иглой-капельницей 

Это удобно для нанесения точного количества воды (или неразбавленного красителя) на предметное стекло для закрепления листьев и т. д. Это также удобно для смывания почвы и другого мусора с образцов. Убедитесь, что вы покупаете один с очень тонкой иглой. Некоторые даже поставляются с набором различных наконечников игл.

Горки для полых колодцев

Они похожи на обычные предметные стекла для микроскопа, но имеют небольшое углубление в центре и предназначены для исследования более крупных образцов. Например, они полезны для просмотра целых побегов печеночников, чтобы увидеть нижние листья и ориентацию листьев, или целых побегов небольших акрокарпов при поиске мужских органов или ризоидных клубней.

Источник: rastenievod.com

Комментариев нет.